ٹیسٹ کا خلاصہ اور وضاحت
ملیریا ایک مچھر سے پیدا ہونے والی، ہیمولیٹک، بخار کی بیماری ہے جو 200 ملین سے زیادہ لوگوں کو متاثر کرتی ہے اور ہر سال 1 ملین سے زیادہ افراد کو ہلاک کرتی ہے۔یہ پلازموڈیم کی چار اقسام کی وجہ سے ہوتا ہے: P. falciparum، P. vivax، P. ovale، اور P. ملیریا۔یہ پلازموڈیا تمام انسانوں کے erythrocytes کو متاثر اور تباہ کرتے ہیں، جس سے سردی لگتی ہے، بخار، خون کی کمی اور splenomegaly پیدا ہوتا ہے۔P. فالسیپیرم دیگر پلازموڈیل پرجاتیوں کے مقابلے میں زیادہ شدید بیماری کا سبب بنتا ہے اور ملیریا سے ہونے والی زیادہ تر اموات کا سبب بنتا ہے۔P. falciparum اور P. vivax سب سے عام پیتھوجینز ہیں، تاہم، پرجاتیوں کی تقسیم میں کافی جغرافیائی تغیر پایا جاتا ہے۔
روایتی طور پر، ملیریا کی تشخیص جیمسا پر موجود جانداروں کے پردیی خون کے داغ دار موٹے داغوں سے ہوتی ہے، اور پلازموڈیم کی مختلف انواع کو متاثرہ erythrocytes1 میں ان کی ظاہری شکل سے پہچانا جاتا ہے۔یہ تکنیک درست اور قابل بھروسہ تشخیص کرنے کی صلاحیت رکھتی ہے، لیکن صرف اس صورت میں جب ہنر مند مائکروسکوپسٹ کی طرف سے طے شدہ پروٹوکول 2 کا استعمال کیا جائے، جو دنیا کے دور دراز اور غریب علاقوں کے لیے بڑی رکاوٹیں پیش کرتا ہے۔
ملیریا پی ایف/پین اینٹیجن ریپڈ ٹیسٹ کٹ ان رکاوٹوں کو حل کرنے کے لیے تیار کی گئی ہے۔اس ٹیسٹ میں P. فالسیپیرم مخصوص پروٹین کے لیے مونوکلونل اور پولی کلونل اینٹی باڈیز کا ایک جوڑا، ہسٹیڈائن ریپیٹ پروٹین II (pHRP-II)، اور پلازموڈیم لییکٹیٹ ڈیہائیڈروجنیز (pLDH) کے لیے مونوکلونل اینٹی باڈیز کا ایک جوڑا استعمال کیا جاتا ہے، جو ایک پروٹین کی چار انواع سے تیار ہوتا ہے۔ پلازموڈیم، اس طرح P. فالسیپیرم اور یا دیگر تینوں میں سے کسی ایک پلازموڈیا کے ساتھ بیک وقت انفیکشن کا پتہ لگانے اور فرق کرنے کے قابل بناتا ہے۔یہ لیبارٹری کے آلات کے بغیر، غیر تربیت یافتہ یا کم سے کم ہنر مند اہلکار انجام دے سکتے ہیں۔
اصول
پی ایف/پین ملیریا ریپڈ ٹیسٹ کٹ ایک لیٹرل فلو کرومیٹوگرافک امیونوسے ہے۔ٹیسٹ سٹرپ کے اجزاء پر مشتمل ہوتا ہے: 1) ایک برگنڈی رنگ کا کنجوگیٹ پیڈ جس میں ماؤس اینٹی pHRP-II اینٹی باڈی ہے جس میں کولائیڈ گولڈ (pHRP II-گولڈ کنجوگیٹس) اور ماؤس اینٹی pLDH اینٹی باڈی کولائیڈ گولڈ (pLDH-گولڈ کنجوگیٹس) کے ساتھ مل جاتی ہے۔
2) نائٹروسیلوز جھلی کی پٹی جس میں دو ٹیسٹ بینڈ (پین اور پی وی بینڈ) اور ایک کنٹرول بینڈ (سی بینڈ) ہوتے ہیں۔پین بینڈ مونوکلونل اینٹی پی ایل ڈی ایچ اینٹی باڈی کے ساتھ پہلے سے کوٹڈ ہوتا ہے جس کے ذریعے پلازموڈیا کی چار اقسام میں سے کسی کے ساتھ انفیکشن کا پتہ لگایا جاسکتا ہے، پی ایف بینڈ کو پی ایف انفیکشن کا پتہ لگانے کے لیے پولی کلونل اینٹی پی ایچ آر پی-II اینٹی باڈیز کے ساتھ پری لیپت کیا جاتا ہے، اور C بینڈ بکری مخالف ماؤس IgG کے ساتھ لیپت ہے۔
پرکھ کے دوران، خون کے نمونے کی مناسب مقدار ٹیسٹ کیسٹ کے نمونے کے کنویں (S) میں بھیجی جاتی ہے، بفر ویل (B) میں ایک lysis بفر شامل کیا جاتا ہے۔بفر میں ایک صابن ہوتا ہے جو خون کے سرخ خلیات کو لیز کرتا ہے اور مختلف پلازموڈیم اینٹیجنز کو جاری کرتا ہے، جو کیسٹ میں رکھی پٹی میں کیپلیری عمل کے ذریعے منتقل ہوتے ہیں۔pHRP-II اگر نمونہ میں پیش کیا جائے تو pHRP II-گولڈ کنجوگیٹس سے منسلک ہو جائے گا۔اس کے بعد امیونو کمپلیکس کو جھلی پر پری لیپت اینٹی pHRPII اینٹی باڈیز کے ذریعے پکڑا جاتا ہے، جس سے ایک برگنڈی رنگ کا Pf بینڈ بنتا ہے، جو Pf مثبت ٹیسٹ کے نتیجے کی نشاندہی کرتا ہے۔pLDH اگر نمونے میں پیش کرتا ہے تو pLDH گولڈ کنجوگیٹس سے منسلک ہو جائے گا۔اس کے بعد امیونو کمپلیکس کو جھلی پر پری لیپت اینٹی pLDH اینٹی باڈی کے ذریعے پکڑا جاتا ہے، جس سے ایک برگنڈی رنگ کا پین بینڈ بنتا ہے، جو پلاسموڈیم مثبت ٹیسٹ کے نتائج کی نشاندہی کرتا ہے۔پین بینڈ کی غیر موجودگی میں، دیگر تین پلاسموڈیا میں سے کسی کے لیے بھی مثبت ٹیسٹ کے نتائج کی سفارش کی جا سکتی ہے۔
کسی بھی ٹیسٹ بینڈ (پین اور پی ایف) کی غیر موجودگی منفی نتیجہ بتاتی ہے۔ٹیسٹ میں ایک اندرونی کنٹرول (C بینڈ) ہوتا ہے جس میں بکرے کے اینٹی ماؤس IgG/mouse IgG (pHRP-II اور pLDH-گولڈ کنجوگیٹس) کے امیونو کمپلیکس کے برگنڈی رنگ کے بینڈ کی نمائش ہونی چاہیے، قطع نظر اس کے کہ کسی بھی ٹیسٹ بینڈ پر رنگ کی ترقی ہو۔ .بصورت دیگر، ٹیسٹ کا نتیجہ غلط ہے اور نمونہ کو کسی دوسرے آلے سے دوبارہ جانچنا ضروری ہے۔
